V klinickej praxi sa na stanovenie bilirubínu a jeho frakcií v krvnom sére používajú rôzne metódy.
Najbežnejší z nich je biochemický Metóda Jendrassik-Grof
Je založená na interakcii bilirubínu s diazotovanou kyselinou sulfanilovou za vzniku azopigmentov. V tomto prípade viazaný bilirubín (bilirubín-glukuronid) poskytuje rýchlu („priamu“) reakciu s diazoreaktívnou látkou, zatiaľ čo reakcia voľného (nenaviazaného na glukuronid) bilirubínu prebieha oveľa pomalšie. Na jej urýchlenie sa používajú rôzne urýchľovacie látky, napríklad kofeín (metóda Jendrassik-Cleggorn-Groff), ktoré uvoľňujú bilirubín z proteínových komplexov („nepriama“ reakcia). V dôsledku interakcie s diazotovanou kyselinou sulfanilovou tvorí bilirubín farebné zlúčeniny. Merania sa vykonávajú na fotometri.
POSTUP URČENIA
Činidlá sa vstreknú do 3 skúmaviek (2 experimentálne vzorky a slepá vzorka), ako je uvedené v tabuľke. Diazoreakcia
Na stanovenie viazaného bilirubínu sa meranie uskutočňuje 5-10 minút po pridaní diazozmesi, pretože nenaviazaný bilirubín reaguje pri dlhšom státí. Na stanovenie celkového bilirubínu sa vzorka na vývoj farby nechá 20 minút odstáť, potom sa zmeria na fotometri. Ďalším státím sa farba nemení. Meranie sa uskutočňuje pri vlnovej dĺžke 500-560 nm (filter zeleného svetla) v kyvete s hrúbkou vrstvy 0,5 cm proti vode. Od indikátorov získaných meraním celkového a konjugovaného bilirubínu sa odpočíta indikátor slepej vzorky. Výpočet sa robí podľa kalibračného plánu. Zistí sa obsah celkového a konjugovaného bilirubínu Metóda Jendrassika, Cleggorna a Grofa je jednoduchá, v praxi vhodná, nezahŕňa použitie deficitných činidiel a je najprijateľnejšia pre praktické laboratóriá. Odporúča sa uviesť stanovenie ihneď po odbere vzoriek, aby sa zabránilo oxidácii bilirubínu na svetle. Sérová hemolýza znižuje množstvo bilirubínu v pomere k prítomnosti hemoglobínu. Preto by sa sérum nemalo hemolyzovať.
Rušenie spôsobuje množstvo látok - hydrokortizón, androgény, erytromycín, glukokortikoidy, fenobarbital, kyselina askorbová.
Nastavenie kalibračného grafu metódou endrassik.
Metóda I - Shelonga-Vendes využívajúca stabilizačné vlastnosti proteínu krvného séra. Zásobný roztok bilirubínu: v 50 ml banke rozpustite 40 mg bilirubínu v 30-35 ml 0,1 mol/l roztoku uhličitanu sodného Na2CO3. Dobre pretrepte, aby ste zabránili tvorbe bublín. Zrieďte na 50 ml roztokom 0,1 mol/l Na2CO3 a niekoľkokrát premiešajte. Roztok je stabilný iba 10 minút od začiatku prípravy. Následne dochádza k oxidácii bilirubínu. Pracovný roztok bilirubínu: Do 13,9 ml čerstvého nehemolyzovaného séra zdravého človeka pridajte 2 ml čerstvo pripraveného zásobného roztoku bilirubínu a 0,1 ml 4 mol/l roztoku kyseliny octovej. Dobre premiešajte. Tým sa uvoľnia bubliny oxid uhličitý. Pracovný roztok je stabilný niekoľko dní. Tento roztok obsahuje presne o 100 mg/l alebo 171 µmol/l viac bilirubínu ako sérum použité na prípravu roztoku. Aby sa z výpočtov vylúčilo množstvo bilirubínu obsiahnutého v tomto sére, pri meraní na fotometri sa hodnoty extinkcie zodpovedajúcich riedení kompenzačnej tekutiny odpočítajú od hodnôt extinkcie kalibračných vzoriek. Na prípravu kompenzačnej tekutiny zmiešajte 13,9 ml rovnakého séra, ktoré bolo použité na prípravu kalibračného roztoku bilirubínu, 2 ml 0,1 mol/l roztoku uhličitanu sodného a 0,1 ml 4 mol/l roztoku kyseliny octovej. Na zostavenie kalibračného grafu sa pripraví séria riedení s rôznym obsahom bilirubínu. K získaným riedeniam sa pridá 1,75 ml kofeínového činidla a 0,25 ml diazo zmesi. Ak sa objaví zákal, môžete pridať 3 kvapky 30% roztoku hydroxidu sodného. Meranie sa uskutočňuje za rovnakých podmienok ako v experimentálnych vzorkách, po 20 minútach. Riedenia podobné kalibračným vzorkám (ako je uvedené nižšie) sa pripravia z kompenzačnej kvapaliny a potom sa spracujú rovnakým spôsobom ako kalibračné vzorky.
Na stanovenie bilirubínu a jeho frakcií v krvnej plazme sa používajú rôzne metódy, z ktorých najbežnejšia je metóda Endrashik-Grof. Metóda je založená na interakcii bilirubínu s kyselinou sulfanilovou a dusičnanom sodným. Viazaný bilirubín zároveň poskytuje rýchlu reakciu, preto dostal názov priama a voľná - pomalšia reakcia, na urýchlenie ktorých sa používajú rôzne látky (kofeín, etanol atď., ktoré najskôr uvoľňujú bilirubín z proteínových komplexov) , preto sa nazýva nepriama.
Rôzne metódy detekcie bilirubínu v moči sú založené na jeho premene pôsobením oxidačných činidiel na iné látky, ktoré majú zelenú alebo červenú farbu.
Na určenie bilirubínu používa sa kolorimetrická metóda, ktorej základom je van den bergovej reakcie.
Reakcia prebieha v 2 stupňoch: v prvom stupni sa vplyvom kyseliny chlorovodíkovej preruší tetrapyrolový reťazec, čím sa vytvoria dva dipyroly, v druhom sa oba dipyrolové deriváty diazotujú kyselinou diazofenylsulfónovou a premenia sa na azobilirubín.
Frakčný obsah bilirubínu sa stanovuje pomocou modifikovanej Van den Bergovej metódy, ktorú navrhol Jendrassik.
Metóda je akceptovaná ako jednotná.
(A. A. H. Van den Bergh, 1869-1943, dánsky lekár)
metóda kvalitatívneho a kvantitatívneho stanovenia bilirubínu v krvnom sére, založená na objavení sa červenej alebo ružovej farby pri interakcii s Erlichovým diazo činidlom; kvantifikácia sa vykonáva kolorimetricky.
Van Den Broek Arthur Müller- (1876-1924) - nemecký filozof, jeden zo zakladateľov hnutia "konzervatívnej revolúcie". Dostojevského prekladateľ nemecký. Bol priateľom s ruským konzervatívnym filozofom......
Politický slovník
Reakcia- Odpor voči sociálnemu pokroku.
Politický slovník
Kruhová reakcia- - všeobecný mechanizmus, ktorý prispieva k vzniku a rozvoju spontánnych foriem masového správania (D.V. Olshansky, s. 425)
Politický slovník
Boomen (boomen) Joseph Van Den (1931-1988) je holandský ekonóm a demograf. Študoval sociálno-ekonomické dôsledky starnutia populácie, pracoval v Hospodárskej komisii pre Európu (1978-1988).
Ekonomický slovník
Reakcia- reakcie, š. (lat. reakcia) (kniha). 1. iba jednotky Politika, štátny politický režim, uskutočňovanie návratu a ochrany starých poriadkov bojom proti revolucionárovi ........
Slovník Ušakov
Reakcia- rýchly pokles cien po predchádzajúcom
rast.
Ekonomický slovník
Reakcia ponuky— Zvýšená produktivita v dôsledku meniacich sa stimulov; diskutované najmä v súvislosti s liberalizáciou trhu v dôsledku štrukturálnych úprav, predovšetkým......
Ekonomický slovník
Reakcia, klesajúce výmenné kurzy— Padajúce úvodzovky cenné papiere po dlhšom období rastúcich cien, pravdepodobne v dôsledku vyberania ziskov alebo nepriaznivých zmien. Pozri tiež opravu.
Ekonomický slovník
Stevin, Simon Van (1548-1620)- - predstaviteľ holandského účtovníctva, prvý, kto nazval účtovníctvo vedou. Stevin veril, že gól účtovníctvo- definícia celého národného bohatstva ........
Ekonomický slovník
Funkcia odozvy predaja — -
pravdepodobná predpoveď
objem predaja za dané časové obdobie rôzne úrovne náklady na jednu alebo viac položiek
komplexné
marketing.
Ekonomický slovník
reakcia (reakcia)- Zvrátenie prevládajúceho trhového trendu v dôsledku nadmerného predaja na klesajúcom trhu (keď niektorých kupujúcich priťahuje nízka cena......
Ekonomický slovník
Abel-Tatarinova reakcia- (G. I. Abelev, nar. 1928, sovietsky imunológ; Yu. S. Tatarinov, nar. 1928, sovietsky biochemik) pozri Alfa-fetoproteínový test.
Veľký lekársky slovník
Adamkevičova reakcia- (A. Adamkiewicz, 1850-1921, rakúsky patológ; synonymum Adamkevich-Hopkins-Kohlova reakcia) farebná kvalitatívna reakcia pre proteíny obsahujúce tryptofán a tryptofán, na báze fialovo-modrej ........
Veľký lekársky slovník
Adamkevich-Hopkins-Kohlova reakcia- (A. Adamkiewicz, 1850-1921, rakúsky patológ; G. Hopkins, 1861-1947, anglický biochemik; L. Cole, nar. 1903, francúzsky patológ) pozri Adamkevichovu reakciu.
Veľký lekársky slovník
Adaptívna odozva- pozri Adaptívna reakcia.
Veľký lekársky slovník
Alergická reakcia- všeobecný názov klinických prejavov precitlivenosť organizmu na alergén.
Veľký lekársky slovník
Alergická reakcia oneskoreného typu- (syn. kitergická reakcia) A. p., vyvíja sa do 24-48 hodín po expozícii špecifickému alergénu; pri výskyte A. p. h. t.j. hlavná úloha patrí ........
Veľký lekársky slovník
Typ okamžitej alergickej reakcie- (syn. chimergická reakcia) A. R., vyvíja sa za 15-20 min. po vystavení špecifickému alergénu, napr. s anafylaktickým šokom; pri výskyte A. p. n. t...........
Veľký lekársky slovník
Alergická reakcia- A. r. na skrížene reaktívne (bežné) antigény.
Veľký lekársky slovník
Alergická reakcia— (nrk) pozri Anafylaktoidná reakcia.
Veľký lekársky slovník
Anamnestická reakcia- imunitná odpoveď organizmu na opakované zavedenie antigénu, charakterizovaná výrazne vyšším titrom protilátok a kratšími obdobiami ich výskytu v porovnaní s ........
Veľký lekársky slovník
Anafylaktoidná reakcia- (anafylaxia + grécky pohľad eidos; synonymum: alergická reakcia NRK, anafylaktická reakcia, fenomén parahypergie) - nešpecifická alergická reakcia charakterizovaná ........
Veľký lekársky slovník
Anafylaktická reakcia- pozri Anafylaktoidná reakcia.
Veľký lekársky slovník
Antabuse Alcohol Reaction- (syn. teturam-alkoholová reakcia) komplex symptómov vegetatívno-somatického (hyperémia kože, nasledovaná bledosťou, tachykardiou, dýchavičnosťou, prudkým poklesom krvného tlaku ........
Veľký lekársky slovník
Aristovského-Fanconiho reakcia- (historik; V. M. Aristovskij, 1882-1950, sovietsky mikrobiológ a imunológ; G. Fanconi, nar. 1892, švajčiarsky pediater) alergický intradermálny test so suspenziou usmrtených streptokokov na ...... ..
Veľký lekársky slovník
Aglutinačná reakcia- (RA) - metóda na detekciu a kvantifikáciu Ag a Ab, založená na ich schopnosti vytvárať aglomeráty viditeľné voľným okom. Na klinike infekcií. choroby...........
Mikrobiologický slovník
Aglutinačná reakcia na skle- - expresná technika tuhnutia RA, pri ktorej sa imúnne s-ku a korpuskulárne Ag miešajú na povrch čistého predmetu alebo špeciálneho (s krúžkami) skla V spojení ........
Mikrobiologický slovník
Aglutinačná inhibičná reakcia- inhibícia aglutinácie Ag homológnymi Ab ako výsledok predbežného kontaktu Ab so študovaným Ag, zvyčajne haptického charakteru Na základe konkurencie Ag o paratop Ab Vysoko citlivý
Mikrobiologický slovník
Reakcia aglutinácia-lýza- pozri Leptospiróza.
Mikrobiologický slovník
Reakcia- (slangovo) - tu: prudký pokles cien po predchádzajúcom zvýšení.
Právny slovník
Voľný bilirubín je toxický, nerozpustný vo vode a cirkuluje v krvi v kombinácii s albumínom. Tento bilirubín spôsobuje nepriamu Van den Bergovu reakciu (po vyzrážaní albumínov alkoholom), preto sa nazýva nepriamy.
Nepriamy bilirubín, ktorý je spojený s albumínom, neprechádza cez intaktné glomerulárne membrány a nefiltruje sa do moču.
Vylučovanie bilirubínu sa uskutočňuje žlčou cez črevá. Bilirubín viazaný na albumín je transportovaný krvou do pečene. Bilirubín ľahko preniká cez membrány hepatocytov, albumín zostáva v krvnom obehu. V hepatocytoch bilirubín podlieha konjugácii s kyselinou glukurónovou, čím sa mení na mono- a diglukuronid bilirubínu. Vzniknuté bilirubinglukuronidy sú netoxické, ľahko rozpustné. Posielajú sa spolu so žlčou do čriev na vylučovanie z tela.
Z čreva glukuronidy bilirubínu čiastočne vstupujú do krvného obehu a v krvi predstavujú zlomok priameho bilirubínu, ktorý poskytuje priamu Van den Bergovu reakciu.
Priamy bilirubín, na rozdiel od nepriameho bilirubínu, ľahko prechádza cez obličkové filtre a môže byť vylučovaný močom.
Za fyziologických podmienok obsahuje krvné sérum približne 25 % priameho bilirubínu (viazaného na kyselinu glukurónovú) a 75 % nepriameho bilirubínu (albumín-bilirubín).
Celkový bilirubín v krvi je teda celkové množstvo nepriameho a priameho bilirubínu.
O zdravých ľudí krvné sérum obsahuje bilirubín 1,7-20,5 µmol/l; priamy - 0,4-5,1 µmol / l.
Na stanovenie bilirubínu sa používa kolorimetrická metóda, ktorá je založená na Van den Bergovej reakcii. Reakcia prebieha v dvoch stupňoch: v prvom sa vplyvom kyseliny chlorovodíkovej preruší tetrapyrolový reťazec a vytvoria sa dva dipyroly, v druhom sa oba dipyrolové deriváty diazotujú kyselinou diazofenylsulfónovou a premenia sa na azobilirubín. Frakčný obsah bilirubínu sa stanovuje pomocou modifikovanej Van den Bergovej metódy, ktorú navrhol Jendrassik.
Metóda je akceptovaná ako jednotná.
Princíp metódy
Bilirubín reaguje azokondenzáciou s diazotovanou kyselinou sulfanilovou za vzniku roztoku azofarbiva. Intenzita farby je úmerná obsahu bilirubínu a zisťuje sa fotometricky.
Pôvodná Van den Bergova metóda stanovuje len povahu reakcie (priama, nepriama, oneskorená), t.j. v krvnom sére je prevaha jedného alebo druhého bilirubínu. Metóda Jendrassika, Cleggorna a Grofa umožňuje frakčné stanovenie obsahu bilirubínu. Je jednoduchý, praktický v praxi, nevyžaduje použitie vzácnych činidiel a je najvhodnejší pre praktické laboratóriá.
Odporúča sa uviesť definíciu ihneď po odbere vzoriek, aby sa zabránilo oxidácii bilirubínu na svetle. Sérová hemolýza znižuje množstvo bilirubínu v pomere k prítomnosti hemoglobínu. Preto by sa sérum nemalo hemolyzovať.
Chemický vzorec bilirubínu IXα
Bilirubín(lat. bilisžlč + ruberčervená) - jeden z žlčových pigmentov žlto-červenej farby.
Chemické zloženie molekuly bilirubínu je C 33 H 36 O 6 N 4 . Molekulová hmotnosť - 584,68. AT čistej forme bilirubín je kryštalická látka, pozostávajúce z kryštálov kosoštvorcovo-prizmatickej formy žlto-oranžovej alebo červeno-hnedej farby, ťažko rozpustné vo vode.
Molekula bilirubínu, rovnako ako všetky jeho deriváty, je založená na štyroch pyrolových kruhoch zdedených z hemoglobínu. Dve hydroxylové skupiny tvoria kyslé Chemické vlastnosti bilirubínu a jeho schopnosti tvoriť soli. Usporiadanie hydroxylových skupín má varianty, z ktorých hlavným je ich pripojenie k 2 a 3 pyrolovým kruhom (bilirubín IXα).
Tradične existujú dve hlavné chemické formy bilirubínu:
voľný bilirubín + kyselina glukurónová = konjugovaný bilirubín
V tomto prípade môže byť bilirubín spojený s jednou molekulou kyseliny glukurónovej (bilirubín monoglukuronid) alebo s dvoma (bilirubín diglukuronid).
Bilirubín sa tiež delí na nepriamy a rovno. Po dlhú dobu existuje prax, že nepriamy bilirubín je identifikovaný s voľným a priamym - s viazaným. Ale nie je to celkom pravda.
Faktom je, že pojmy "nepriamy" a "priamy" bilirubín nie sú chemické, ale technologické a odrážajú výsledok bilirubínu, ktorý sa široko používa na laboratórnu identifikáciu. Pretože sa predpokladalo, že nepriamy bilirubín je voľný a priamy bilirubín je výlučne viazaný, tieto výrazy sa používali zameniteľné.
Táto jednoduchá schéma stratila svoju správnosť po objavení inej chemickej formy bilirubínu: biliproteín, alebo delta bilirubínu.
Delta-bilirubín sa zúčastňuje Van den Berghovej reakcie podobne ako viazaný bilirubín a spolu s ním sa zohľadňuje vo výsledku ako priamy. Preto vzorec "priamy bilirubín = viazaný bilirubín" platí len pre zdravých ľudí, u ktorých delta-bilirubín prakticky chýba. Pri niektorých chorobných stavoch môže byť priamy bilirubín 60-90% delta-bilirubínu:
priamy bilirubín = konjugovaný bilirubín + delta bilirubín
Prečítajte si o vlastnostiach a diagnostickej hodnote nižšie.
Takmer jediný zdroj pôvodu bilirubínu v tele je drahokam.
drahokam je štruktúra, ktorá zahŕňa, podobne ako bilirubín, štyri pyrolové kruhy a navyše atóm železa. Hém je súčasťou molekúl hemoglobínu(kyslík nesúci proteín červených krviniek), kontraktilný svalový proteín myoglobínu a bunkové enzýmy cytochrómy.
Hlavný, erytrocytový tok bilirubínu (85% z celkového množstva) sa tvorí v procese využitia hemoglobínu zastaraných (asi 120 dní) erytrocytov. Tieto červené krvinky sú odstránené z krvného obehu a zničené hlavne v slezine, ale aj v pečeni a kostnej dreni. K zvýšeniu bilirubínu erytrocytového pôvodu dochádza pri hemolýze (tzv. hromadný rozpad červených krviniek).
Zo zvyšných zdrojov vznikajú tzv. skrat bilirubínu, čo je až 15 % z jeho celkového množstva. Medzi zdroje skratového bilirubínu patria:
Ako ukazujú denzitometrické štúdie s použitím značených rádioaktívny izotop glycín, hem, ktorý spôsobuje skratový bilirubín, existuje najviac 10 dní. Zároveň sa trvanie existencie hemu normálnych erytrocytov zhoduje so životnosťou samotných erytrocytov - 120 dní. Pri poznaní podielu skratového bilirubínu v jeho celkovej koncentrácii je možné posúdiť povahu chorobného procesu, ale zatiaľ je takáto analýza dostupná iba vo vedeckých štúdiách.
Transformácia hemu na bilirubín, okrem mnohých iných úloh, je tkanivové makrofágy ktoré sú súčasťou imunitného systému tela. Tkanivové makrofágy sú prítomné vo všetkých orgánoch, zvyčajne sa nachádzajú v ich spojivovom tkanive, ale sú sústredené prevažne v slezine, lymfatických uzlinách, pečeni a kostnej dreni. Všetky tkanivové makrofágy sledujú svoj pôvod z monocytov pestovaných v hematopoetickej matrici kostnej drene, ale v rôznych orgánoch sú špecializované na vykonávanie špecifických úloh, a preto majú špeciálne názvy - napríklad Kupfferove bunky pečene, histiocyty sleziny, atď. Predtým sa systém tkanivových makrofágov nazýval retikuloendoteliálny systém, ale tento termín je už zastaraný.
Každý deň v ľudskom tele prejde deštrukciou 2*108 starých erytrocytov. V tomto prípade sa uvoľní 6-8 g hemoglobínu, z ktorého zase pochádza 250-350 mcg bilirubínu.
Uvoľnený hem je absorbovaný makrofágmi, po ktorých sa za účasti vnútrobunkového enzýmu hemoxygenázy mení na intermediárnu látku biliverdin. Súčasne sa z hemu odštiepi atóm železa a oxid uhoľnatý. Biliverdin, ktorý má zelená farba, patrí do počtu pigmentových látok. Navyše, na rozdiel od bilirubínu, je vysoko rozpustný vo vode.
V druhom štádiu štiepenia hemu pomocou enzýmu biliverdin transferázy sa biliverdin transformuje na bilirubín, žlto-oranžovú pigmentovú látku, nerozpustnú vo vode. Ako viete, každá molekula hemoglobínu obsahuje štyri hemové jednotky. V súlade s tým, keď sa rozdelí jedna molekula hemoglobínu, vytvoria sa štyri molekuly bilirubínu a štyri atómy železa.
Ako už bolo spomenuté, oxid uhoľnatý (CO) sa uvoľňuje ako vedľajší produkt pri deštrukcii väzieb hemu uhlíka a je to jediná reakcia v tele, ktorá túto látku produkuje. Táto okolnosť sa využíva v sľubnej výskumnej metóde: meraním koncentrácie oxidu uhoľnatého vo vydychovanom vzduchu možno odhadnúť rýchlosť rozkladu hemu v tele.
Postupná premena hemu na zelený biliverdín a potom na žlto-červený bilirubín vysvetľuje zmenu farby modrín po modrinách z tmavo modrej na modrozelenú a potom na žltú.
Spočiatku sa v tele tvorí iba voľný bilirubín. Viazaný bilirubín sa objavuje neskôr ako výsledok premeny voľného bilirubínu.
V našom tele je teda neustále fungujúci dopravník na produkciu voľného bilirubínu ako súčasť fyziologického mechanizmu nahrádzania starých červených krviniek. To spôsobuje niekoľko ťažko riešiteľných problémov:
V krvnom obehu je voľný bilirubín transportovaný albumínovými proteínmi, ktoré ho držia na svojom povrchu. 1 g albumínu obsahuje 8,5 mg bilirubínu. Komplex albumín-bilirubín je krehký a pri prvej príležitosti sa rozpadne.
Van den Bergova reakcia identifikuje voľný bilirubín ako nepriamy.
Vo svetle najnovší výskum Tradičná myšlienka bilirubínu ako jedinečného „troskového“ produktu sa trochu zmenila. Voľný bilirubín má výrazné antioxidačné vlastnosti a telo ich aktívne využíva.
Antioxidačná aktivita bilirubínu výrazne prevyšuje aktivitu α-tokoferolu (vitamín E), ktorý je považovaný za klasický antioxidant. Takže bilirubín inaktivuje H202 v koncentrácii, ktorá je 10-násobkom jeho vlastnej koncentrácie. Predovšetkým zabraňuje peroxidácii lipidov bunkových membrán, ako aj oxidácii membránových proteínov. Najvýznamnejšie antioxidačné vlastnosti bilirubínu vo vzťahu k nervovému tkanivu a srdcovému svalu, keďže tieto tkanivá nemajú dostatočne silnú vlastnú ochranu proti voľným radikálom.
Zistilo sa, že ľudia s chronicky vysokými hladinami voľného bilirubínu majú výrazne nižšiu pravdepodobnosť, že budú trpieť aterosklerózou ciev a súvisiacimi srdcovými chorobami. Dokázal sa inverzný vzťah medzi hladinou voľného bilirubínu v krvi a srdcovou patológiou.
Jedna štúdia, ktorá zahŕňala 10 000 pacientov, dokázala nižšiu úmrtnosť na nádorové ochorenia u ľudí s vysokou hladinou voľného bilirubínu.
Vo svetle týchto údajov sa zdá byť účelné transformovať vo vode vysoko rozpustný biliverdín na "nepohodlný" nerozpustný bilirubín.
Keďže, ako bolo uvedené vyššie, voľný bilirubín je nerozpustný vo vode, jeho vylučovanie z tela nie je možné bez predchádzajúcej premeny na iné, vo vode rozpustné látky.
Špecifickým miestom takejto transformácie je hlavná štruktúrna jednotka pečene – pečeňová bunka, čiže hepatocyt. Hepatocyty sa zhromažďujú v pečeňových lalôčikoch. Pečeňový lalôčik je usporiadaný tak, že každá pečeňová bunka má na jednej strane kontakt s vlásočnicou žilovej krvi (tzv. sínusoida) a na druhej strane je na ňu napojená žlčová kapilára.
Voľný bilirubín, transportovaný na povrchu albumínu, sa z venóznej krvi sínusoidy presúva najskôr do priestoru Disse, ktorý oddeľuje kapiláru a pečeňovú bunku, a potom cez bunkovú membránu do hepatocytu, pričom sa uvoľňuje z väzby. s albumínom. K takémuto pohybu dochádza bez spotreby energie v dôsledku rozdielu koncentrácie.
Vnútri bunky je bilirubín reverzibilne viazaný na proteíny ligandínu. Ligandíny zabraňujú „úniku“ bilirubínu späť do venóznej kapiláry a tiež ho posúvajú do sieťovej štruktúry – endoplazmatického retikula.
V endoplazmatickom retikule sa nachádzajú tzv. mikrozómy - vezikuly naplnené enzýmami. Na povrchu mikrozómov dochádza za katalytickej účasti enzýmu glukuronyltransferázy k reakcii kombinácie voľného bilirubínu s kyselinou glukurónovou, čím vzniká nová látka – viazaný alebo konjugovaný bilirubín.
Táto reakcia môže prebiehať v jednom alebo dvoch cykloch, pričom sa získa bilirubín monoglukuronid alebo diglukuronid. Pomer monoglukuronidu a diglukuronidu je 4:1.
Gluuronizácia bilirubínu je jednou z prekážok v jeho metabolizme, pretože je limitovaná množstvom enzýmu glukuronyltransferázy. Toto množstvo je u niektorých prudko znížené (menej ako 1-3% normy). dedičné choroby, najmä na .
Obtiažne uvoľňovanie konjugovaného bilirubínu do žlče vedie k jeho hromadeniu v krvi. V takýchto prípadoch sú obličky nútené prevziať funkciu jeho odstránenia z tela, hoci v normálnych podmienkach oni nie. Výskyt bilirubínu v moči je znakom vážneho ochorenia.
Viazaný bilirubín sa svojimi vlastnosťami priaznivo porovnáva s voľným bilirubínom:
Viazaný bilirubín sa zúčastňuje priamej Van den Bergovej reakcie, preto sa bežne označuje ako priamy bilirubín.
Treba si uvedomiť aj zlú vlastnosť viazaného bilirubínu: pri nadmernej koncentrácii v žlči je náchylný na kryštalizáciu a tvorbu bilirubínových kameňov v žlčníku. Pretože vysoká koncentrácia viazaný bilirubín je dôsledok zvýšenej tvorby voľného bilirubínu v organizme, potom príčinou takýchto stavov bývajú iné ochorenia krvného systému.
Jediným orgánom v ľudskom tele, ktorý je schopný premeniť voľný bilirubín na viazaný bilirubín, je teda pečeň.
Rozhodujúca úloha pečene v metabolizme bilirubínu je ešte evidentnejšia, keď si uvedomíme, že 80 % voľného bilirubínu je tiež produkovaných v pečeni Kupfferovými bunkami. Hladina bilirubínu je jedným z najspoľahlivejších ukazovateľov funkčného stavu pečene, pretože takmer celý proces metabolizmu bilirubínu je úzko závislý od tejto funkcie.
Nie je náhoda, že starosť o využitie bilirubínu je priradená pečeni, ktorá sa právom nazýva hlavným chemickým laboratóriom tela. Pečeň premieňa na netoxické chemické formy obrovské množstvo látok, ktoré sa prirodzene tvoria v tele a dostávajú sa do neho zvonka, vrátane liečivých látok.
Niektoré konečné produkty metabolizmu sa z tela vylučujú prevažne obličkami močom, iné pečeňou žlčou. Ktorý z týchto dvoch spôsobov je výhodnejší pre každú špecifickú látku, je spôsobený zvláštnosťami jej chemickej štruktúry a fyziológie pečene a obličiek. Všeobecný princíp je nasledovný: obličky dobre vylučujú látky s molekulovou hmotnosťou menšou ako 300 u. To znamená, že zvyšok sa vylučuje hlavne žlčou vrátane bilirubínu.
Treba povedať, že na spracovanie bilirubínu pečeňová bunka využíva univerzálne enzýmové systémy, ktoré sa spolu s bilirubínom podieľajú na metabolizme mnohých ďalších látok. Spolu so šetrením zdrojov tela táto situácia niekedy vedie k negatívne dôsledky. Faktom je, že množstvo látok, najmä veľa lieky súťažiť s bilirubínom v enzymatických reakciách a v prípade predávkovania sú schopné ho úplne vylúčiť z metabolického procesu. To vedie k hromadeniu nepriameho bilirubínu v organizme a k rozvoju tzv. „nekonjugovaná“ žltačka. Tieto lieky zahŕňajú paracetamol a niektoré ďalšie nesteroidné analgetiká, niektoré antibiotiká.
Viazaný bilirubín sa uvoľňuje z hepatocytu do žlčovej kapiláry a vylučuje sa žlčou do čreva. Uvoľňovanie viazaného bilirubínu do žlčovej kapiláry vyžaduje energiu, takže poškodenie pečeňových buniek pri hepatitíde, cirhóze atď. vedie k poruche tohto procesu.
Konjugovaný bilirubín sa teda vylučuje s prietokom žlče do čreva. Bilirubín je to, čo dáva žlči jej špinavú zelenú farbu.
Keďže mikroorganizmy žijúce v čreve aktívne pracujú na jeho obsahu, bilirubín tiež podlieha ďalšej transformácii. V procese spracovania bilirubínu v čreve sa tvoria početné medziprodukty. Proces spracovania bilirubínu v čreve je viacstupňový a prebieha s tvorbou mnohých medziproduktov.
Hlavné fázy črevnej transformácie:
Medzi urobilinogénmi sú najdôležitejšie tieto látky:
Väčšina urobilinogénov sa nakoniec premení na konečné pigmentové produkty - stercobilín a urobilín, ktoré majú oranžovo-hnedú farbu. Práve tieto látky dodávajú výkalom ich charakteristickú farbu. Zmena farby výkalov naznačuje neprítomnosť bilirubínu v nich, čo sa deje pri hepatitíde alebo keď sú žlčové cesty zablokované. 10-20% urobilinogénov sa absorbuje z čreva a vracia sa do pečene cez systém portálnej žily. Pečeň s nimi robí, čo môže: premieňa ich na konjugovaný bilirubín a posiela ich späť do čriev. Normálne sa močom nevylúči viac ako 2 – 5 % urobilinogénov. Takéto malé množstvo sa pri bežnom laboratórnom vyšetrení moču nezistí.
Pri hepatitíde sa pečeň nedokáže vyrovnať s utilizáciou urobilinogénov, v dôsledku čoho sa nachádzajú v moči. je dôležitým diagnostickým znakom ochorení pečene.
Je čas vysvetliť pôvod niektorých podivných názvov: "priamy" a "nepriamy" bilirubín. A dve formy bilirubínu sú tak pomenované ľahkou rukou pána Van Den Berga, ktorý už v roku 1916 vyvinul reakciu na identifikáciu bilirubínu v krvnom sére pomocou Erlichovho činidla. Po 100 rokoch zostáva reakcia, po ňom pomenovaná ako Van den Bergova reakcia, v laboratórnej praxi hlavnou metódou štúdia obsahu bilirubínu.
Bez toho, aby sme sa ponorili do detailov techniky, ktorá prešla za sto rokov mnohými úpravami, si všimneme jej základnú vlastnosť - dvojstupňovú implementáciu:
nepriamy bilirubín = celkový bilirubín - priamy bilirubín
Van den Berghova reakcia spolu s nepochybnými výhodami, vrátane ľahkej implementácie a jasnosti výsledku, má významnú nevýhodu - poskytuje nadhodnotený obsah priameho bilirubínu. Takže v sére zdravých ľudí táto metóda deteguje až 5,4 µmol/l priameho bilirubínu, čo je až 25 % z celkového množstva. V skutočnosti, ako ukazujú presnejšie metódy, u týchto ľudí je celkový bilirubín takmer 100% nepriamy a prakticky neexistuje priamy bilirubín. V klinickej praxi je však dôležitejšie poznať nie samotný obsah bilirubínu, ale jeho dynamiku, pre ktorú je potrebné zabezpečiť porovnateľnosť výsledkov získaných v rôznych časoch a v rôznych laboratóriách.
Na detekciu bilirubínu boli vyvinuté ďalšie metódy, Detailný popis ktoré sú mimo rozsahu tohto článku:
Vysokoúčinná kvapalinová chromatografia je z týchto metód najsľubnejšia. Táto technika vám umožňuje určiť obsah štyroch frakcií bilirubínu:
delta bilirubínu je zlúčenina konjugovaného bilirubínu (biglukuronid alebo bilirubín monoglukuronid) s albumínom. Vo vedeckej literatúre sa často používa iný názov pre túto látku: "biliproteín". Táto látka je žltá.
Van den Berghova reakcia neumožňuje oddelené stanovenie delta-bilirubínu a identifikuje ho spolu s bilirubín-glukuronidmi ako priamy, pretože všetky tieto látky reagujú priamo s Ehrlichovým činidlom podobným spôsobom. Vysokoúčinná kvapalinová chromatografia sa používa na selektívne stanovenie jeho obsahu v krvnom sére.
Z biochemických a fyziologických aspektov má delta-bilirubín množstvo vlastností, ktoré nám vo všeobecnosti umožňujú považovať ho spolu s voľným a viazaným bilirubínom za nezávislú, tretiu formu bilirubínu:
Za normálnych podmienok sa delta-bilirubín nenachádza vo významných množstvách. Jeho obsah sa prudko zvyšuje s cholestázou, t.j. porušením tvorby a vylučovania zložiek žlče na pozadí zachovanej funkcie syntézy konjugovaného bilirubínu. Cholestáza môže byť intrahepatálna pri hepatitíde a cirhóze pečene a extrahepatálna v dôsledku ťažkostí s odtokom žlče v extrahepatálnych žlčových cestách, ku ktorému zvyčajne dochádza, keď sú zablokované žlčovým kameňom.
Obsah delta-bilirubínu v cholestáze môže dosiahnuť 60-70 a dokonca 90% priameho. Vďaka svojej „prežitosti“ v organizme zostáva delta-bilirubín (a zároveň priamy bilirubín ako celok) vysoký ešte 1-1,5 týždňa po normalizácii odtoku žlče. To vysvetľuje predtým nepochopiteľný jav, keď priamy bilirubín dlho zostáva vysoká, napriek jasnému klinickému zlepšeniu a normalizácii najmä iných laboratórnych parametrov.
Súčasne nedochádza k zvýšeniu obsahu delta-bilirubínu s nekonjugovanou hyperbilirubinémiou (akumulácia nekonjugovaného bilirubínu v krvi, čo sa deje s, a niektoré ďalšie stavy).
Vo svojej obvyklej a najstabilnejšej konfigurácii je molekula bilirubínu zložená tak, že niektoré aktívne skupiny sú blokované inými, čo určuje jej nerozpustnosť. Pod vplyvom modrého svetla sa bilirubín dokáže premeniť na početné fotoprodukty, z ktorých väčšina je vďaka neblokovaným hydroxylovým skupinám vysoko rozpustná vo vode.
Svojho času sa chemici začali zaujímať o paradoxnú rozpustnosť voľného bilirubínu. Teoreticky by molekula bilirubínu v dôsledku prítomnosti dvoch hydroxylových skupín COOH - mala mať výraznú polaritu. Ako viete, látky s polarizovanou molekulou sú rozpustné vo vode a nerozpustné v tukoch. V skutočnosti sa voľný bilirubín správa opačne.
Hádanka bola vyriešená pomocou röntgenovej kryštalografie. Ukázalo sa, že molekula voľného bilirubínu má takú priestorovú konfiguráciu, v ktorej sú polarizujúce hydroxylové skupiny blokované vnútornými medzivodíkovými väzbami (tzv. Z-Z spojenia). Táto konfigurácia molekuly bilirubínu je najstabilnejšia a je hlavná, pretože má minimum priestoru a energie. Zistilo sa tiež, že popri základnej konfigurácii existuje množstvo ďalších možností.
Medzi nimi je najväčší záujem fotografické produkty bilirubínu, ktoré vznikajú vplyvom modrého svetla v prítomnosti atómového kyslíka. Molekuly bilirubínu, absorbujúce energiu svetelných fotónov, menia vnútorné medziatómové väzby Z-Z na väzby Z-E a E-E s vyššou energiou. Súčasne so zmenou priestorovej konfigurácie molekúl sa radikálne menia aj ich vlastnosti – stávajú sa rozpustnými vo vode.
Fotoprodukty sa vďaka dobrej rozpustnosti vo vode rýchlo vylučujú z tela pečeňou. najviac vysoká rýchlosť vylučovanie má jeden z fotoproduktov s E-E väzby, pomenovaný lumirubín. Fotoprodukty sa vyznačujú krátkou životnosťou, keďže takéto molekuly sa pri prvej príležitosti zbavia prebytočnej energie a vrátia sa do pôvodnej základnej konfigurácie.
Schopnosť voľného bilirubínu vytvárať vo vode rozpustné fotoprodukty sa využíva pri liečbe novorodeneckej žltačky fototerapiou.
Prečítajte si pokračovanie:
) metóda kvalitatívneho a kvantitatívneho stanovenia bilirubínu v krvnom sére, založená na objavení sa červenej alebo ružovej farby pri interakcii s Ehrlichovým diazo činidlom; kvantifikácia sa vykonáva kolorimetricky.
Veľký lekársky slovník. 2000 .
Test, ktorý vám umožňuje určiť príčinu vývoja žltačky u pacienta: či už je spôsobená hemolýzou, ochorením pečene alebo žlčových ciest. Vzorka krvi pacienta sa zmieša s kyselinou sulfanilovou, kyselinou chlorovodíkovou a dusitanom sodným. Ak… … lekárske termíny
TEST VAN DEN BERG- (van den Berghov test) test na určenie príčiny rozvoja žltačky u pacienta: či je spôsobená hemolýzou, ochorením pečene alebo žlčových ciest. Vzorka krvi pacienta sa zmieša s kyselinou sulfanilovou, kyselinou chlorovodíkovou a ... ... Výkladový slovník medicíny
DIAZOREAKCIE- v zmysle, že sa tento termín používa v laboratórnej praxi, spočívajú vo vytváraní farebných produktov v dôsledku pôsobenia diazoreagentu na skúmané látky. O mnohých látkach je známe, že poskytujú zlúčeniny s diazoreaktívnymi vlastnosťami. ... ...
KRV- KRV, tekutina, ktorá vypĺňa tepny, žily a kapiláry tela a pozostáva z priehľadnej svetložltej farby. farba plazmy a tvarovaných prvkov v nej suspendovaných: červené krvinky alebo erytrocyty, biele alebo leukocyty a krvné plaky alebo ... Veľká lekárska encyklopédia
RETICULO- ENDOTELIÁLNY PRÍSTROJ, retikuloendoteliálny systém, retikuloendotel. jeden. Historické informácie. Faktický materiál, ktorý neskôr tvoril základ doktríny R. e. a. zhromaždené mnohými autormi na rôzne účely od 70. rokov ... ... Veľká lekárska encyklopédia
Žltačka- ŽLTÁKA, Obsah: Etiológia a patogenéza ............... 13 Klinické formy ............... 20 Prevencia a liečba I! .... .. ..... 26 Žltačka v chirurgii............. 28 Žltačka novorodencov. . . . ........ 31 Tehotenská žltačka ................... Veľká lekárska encyklopédia
METÓDY LEKÁRSKEHO VÝSKUMU - І. Všeobecné zásady zdravotný výskum. Rast a prehlbovanie našich vedomostí, stále viac technického vybavenia kliniky, založené na využívaní najnovšie úspechy fyzika, chémia a technika, s tým spojená komplikácia metód ... ... Veľká lekárska encyklopédia
OBLITERATION- (lat. obliteratio deštrukcia), termín používaný na označenie uzavretia, deštrukcie určitej dutiny alebo lúmenu prostredníctvom rastu tkaniva prichádzajúceho zo strany stien tohto dutinového útvaru. Uvedený rast je častejšie ...... Veľká lekárska encyklopédia
